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特异蛋白质表达分析_基金工程与分子生

时间:2020-02-09百科知识
特异蛋白质表达分析_基金工程与分子生

实验十九 特异蛋白质表达分析

一、实验原理

多细胞生物在发育过程中通过在不同时期、不同部位或者在特定的环境和刺激条件下,合成特异的蛋白质,定向执行相应的功能。因此通过对特异蛋白质在生物体中的存在部位和存在时期的检测分析能够分析该蛋白的生物学功能,可以作为功能分析的一种手段。

特异蛋白质的检测分析可以采用抗原抗体反应的免疫分析方法。识别特异蛋白的抗体是具有专一性的,是用纯化的特异蛋白注射动物后在动物体内产生的,称为一抗。一抗可以与特异蛋白专一结合。识别并与一抗结合的抗体称为二抗,二抗上面可以连接碱性磷酸酶或其他催化颜色反应的酶,或者荧光素。通过观察颜色或荧光素存在的部位可以表现特异蛋白的存在。

对特异蛋白在生物体中存在的部位和时期的鉴定有很多方法。生物化学方法之一是可以提取相应时期和部位生物体组织中的总蛋白,然后将总蛋白用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后电转移到尼龙膜上,然后对尼龙膜上分离的蛋白带分次用一抗、二抗进行识别和结合,最后进行标记酶催化颜色反应,从而鉴定特异蛋白的存在。

二、实验设计

1.提取要鉴定生物材料的总蛋白(参照实验十三)。

2.将提取的总蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分离(参照实验十四)。(www.anred.net.cn)

3.将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上电转移到尼龙膜上(参照实验十四)。

4.对尼龙膜进行免疫交联反应(参照实验十四)。

5.酶催化的显色反应(参照实验十四)。

三、结果分析

1.观察尼龙膜上是否有颜色反应。

2.根据对照和分子量标准,判断有颜色反应的带分子量大小。

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