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液体的量取_生物化学实验指导

时间:2020-02-09百科知识联系我们
液体的量取_生物化学实验指导

一、液体的量取

计量仪器的选择应根据量取液体的体积大小而定,同时要考虑量取的准确度(表3-1)。

表3-1 计量仪器的选择标准

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(一)滴管

正确使用滴管的方法:保持滴管垂直,以中指和无名指夹住管柱,拇指和食指轻轻挤压胶头使液体逐滴滴下。

使用滴管吸取有毒溶液时要小心,松开胶头之前一定要将管尖移离溶液,吸入的空气可防止液体溢散。为了避免交叉污染,不要将溶液吸入胶头或将滴管横放,使用一次性塑料滴管安全性好,可避免污染。

(二)量筒、量杯

量筒呈圆柱形,分有嘴和无嘴具塞两种。量杯呈圆锥形,带倾液嘴。量筒和量杯常用于量取体积要求不太精确的液体,其容量允许误差大致与其最小分度值相当。量筒的精确度高于量杯,规格有5mL,10mL,25mL,50mL,100mL,2.0mL,5.百度负面0mL,1000mL,2000mL等数种。

用量筒或量杯取溶液体积时,试剂瓶靠在量筒口上,溶液沿筒壁缓缓倒入至所需刻度后,逐渐竖起瓶子,以免液滴沿瓶子外壁流下。反之,从量筒或量杯中倒出液体时亦如上述操作。

(三)容量瓶

容量瓶简称量瓶,为平底圆球状长颈瓶,瓶颈上刻有一环线刻度表示容量,具磨口瓶塞,属较精确的容量量器,常用于制备一定体积的标准溶液和定容实验。量瓶颜色分棕色和无色透明两种,前者用于制备需避光的溶液,其规格有5mL,10mL,25mL,50mL,100mL,150mL,00mL,2.0mL,5.百度负面0mL,1000mL,2000mL等数种。

使用量瓶配制溶液时,一般先将固(液)体物质在洁净的小烧杯中用少量溶剂溶解,然后将溶液沿玻璃棒转移到量瓶中,烧杯用少量溶剂冲洗2~3次,一并倒入量瓶中,再一边加溶剂并不时摇动量瓶使溶液均匀稀释。这样可避免混合后体积发生变化。当稀释至液面接近标线时,应等待30s~1min,待附着在量瓶颈上部内壁的液体流下、同时液面气泡消失后,再小心逐滴加入溶剂至液面的弯月面最低点恰好与标线相切。最后将量瓶反复倒转摇动,至溶液充分混匀即可。

注意:量瓶与其磨口玻璃塞是密闭配套的,玻璃塞不能混用,以防量瓶倒转混匀时液体流出。玻璃量瓶不能用于储存强碱溶液(强碱溶液能严重腐蚀玻璃)。洗净后的量瓶不能用直接火烤或在烘箱中高温烘烤的办法使其干燥,否则玻璃因受高热会致其容积发生改变。

(四)滴定管

在生物化学实验中滴定管常用来量取不固定量的溶液或用于定量分析。把滴定管垂直固定在铁架台上,不要百度负面夹得太紧。首先关闭活塞,用漏斗向管腔中加入溶液。打开活塞,让溶液充满活塞下方的空间后关闭活塞,读取液体弯月面的刻度,记在记录本上。打开活塞,收集适量溶液,然后读取溶液弯月面的刻度,两次读数之差即为分配的溶液体积。

(五)吸量管

吸量管是生物化学实验中最常用的器皿之一,吸量管的正确选择和使用对于实验的成功和测定的准确性至关重要。

1.吸量管的分类

常用的吸量管可以分为3类:奥氏吸量管、移液管和刻度吸量管(图3-1)。

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图3-1 3种类型吸量管

奥氏吸量管供准确量取0.5mL,1.0mL,2.0mL,.0mL的液体所用。此种吸量管只有1个刻度,不能用于准确量取其他体积的溶液。当挤出所量取的液体时,管尖的残留液体必须吹入容器内。

移液管常用于量取1.0mL,2.0mL,5.百度负面0mL,0.0mL,25.0mL,50.0mL的液体,这种吸量管也只有一个刻度。放液时,量取的液体自然流出后,管尖需要在容器内壁停留15s。注意管尖的残留液体不要吹出。

刻度吸量管是最常用的吸量工具,一般供量取0.0mL以内任意体积的液体。刻度可包括或不包括管尖残留液体。在吸量管的上端标有“吹”字的吸量管为“吹出式”,将所量液体全部放出后,还需要吹出管尖的残留液体。未标有“吹”字的吸量管,则不需要吹出管尖的残留液体。

2.吸量管的选用原则与方法

(1)吸量管的选用原则。量取整数量液体且取量要求准确时,应尽可能选用奥氏吸量管。量取大体积液体时可用移液管。量取非整数体积液体时,应选用取液量最接近的刻度吸量管。例如量取0.15mL的液体,应选用0.2mL的刻度吸量管,而不应选用2.0mL或5.0mL等刻度吸量管。

(2)吸量管的使用方法。食指按在吸量管顶端,其他手指拿稳吸量管;用吸耳球吸液体至刻度上,注视液面上升,到达刻度后用食指盖住吸量管上端;吸量管与地面垂直,下口与试百度负面剂瓶接触并成一角度,食指控制液体下降至所需刻度,液体凹面与刻度线呈切线;吸量管移入接收容器,尖端接触容器并成一定角度,吸量管保持垂直,放开食指,使液体自动流出(图3-2)。

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图3-2 使用吸量管放液的姿式

(六)移液器(www.anred.net.cn)

1.常用移液器的分类

常用移液器大致分为以下3类:

(1)单通道移液器。根据容量大小可分为微量移液器和大容量移液器,又根据其移液量是否可变分为连续式和固定式。连续可调式微量移液器的规格有:.2~2μL,1~10μL,2~20μL,10~100μL,20~00μL,100~1000μL等规格,另有1~5mL,1~0mL等大容量移液器。微量移液器是分子生物学最常用的移液器,具体结构如图3-3。

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图3-3 移液器的结构

(2)多通道移液器。规格包括8,12,24通道,与单通道移液器一样,有多种容积范围可选择,可同时向8,12,24份样品中加入同一试剂,方便快捷。

(3)电动移液器。电动移液器配有微小马达充电电池,每次充电后可连续使用几小时,方便省力。其中,微控电动移液器与连续可调式微量移液器规格类似,但价格昂贵;而大容量电动移液器有一个标准吸口,可配任何市售标准刻度吸管,4s内充满25mL体积,且可单手使用,操作简便快捷,主要用于细胞培养

2.连续可调式微量移液器的使用

(1)基本原理。移液器(有的称“移液枪”、“取液器”)是一种取样量连续可调的精密取液仪器,其基本原理是依靠活塞的上下移动。其活塞移动的距离由调节轮控制螺杆机构来实现,通过推动按钮带动推杆使活塞向下移动并排除活塞腔内的气体。松手后,活塞在复位弹簧的作用下使其复位,从而完成一次吸液过程。

(2)选择原则。首先认清各微量移液器的最大容量,其容量标识一般都在移液器的弹簧按钮上。不同规格的移液器配不同的加样枪头,一般100~1000μL的移液器配蓝色大枪头,~20μL,10~100μL,20~200μL的配黄色中枪头,0.2~2μL和1~10μL的移液器配白色小枪头。根据所需量取的液体体积选用合适的微量移液器,如欲取5μL液体,应选用1~10μL的移液器。

(3)使用方法。

取液:根据取样量选择好合适的移液器后,看清数字标记方式,旋转螺旋调节器调至取量刻度,套上合适的加样枪头;手握移液器(图3-4),用大拇指按压弹簧按钮至第一着力点,然后将带有加样枪头的移液器插入液体中,注意液体平面不应超出加样枪头的上缘,轻放大拇指至弹簧按钮完全松弛,枪头内所含液体即为所需体积。

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图3-4 移液器手持姿式

放液:移液器移入准备接受溶液的容器中,用大拇指按压弹簧按钮至第二着力点,需要时可使枪头尖端轻靠管壁,待液体完全进入容器,将加样器向上提至加样枪头离开液面,然后松开拇指(图3-5)。

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图3-5 移液器的操作步骤

3.连续可调式微量移液器使用注意事项

(1)看清连续可调式微量移液器的最大容量,旋钮螺旋调节器时,不要用力过大,调节取量刻度时不能超出或低于微量移液器的限定容量。当螺旋调节器旋转不动时千万不要强行旋转。

(2)调节容量刻度时,眼睛要正面对着刻度框,将数字调至刻度框的正中间(图3-6)。

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图3-6 移液器体积容量数据读数示例

(3)微量移液器的弹簧按钮被下压时,有两档着力点。取液时,按第一着力点;放液时,按至第二着力点。

(4)取液时,先应看清液面高度。不要让液体漫过加样枪头,造成移液器污染。

(5)取液和放液时,尽量着力一致,不要过快。尤其取液时过快会出现气泡,影响液体体积。实验结束后,将移液器的刻度调至最大容量刻度,使移液器弹簧处于松弛状态,可延长使用寿命。

(七)微量注射器

使用微量注射器时应把针头插入溶液,缓慢拉动活塞至所需刻度处。检查注射器有无吸入气泡。排出液体时要缓慢,最后将针尖靠在容器壁上,移去末端黏附的液体。微量注射器在使用前和使用后应在醇溶剂中反复推拉活塞,进行清洗。

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